आधारभूत परिचय
एरिथ्रोसाइट लाइसेट रातो रक्त कोशिकाहरू हटाउने सबैभन्दा सरल र सजिलो विधिहरू मध्ये एक हो, अर्थात्, रातो रक्त कोशिकाहरूलाई लाइसेटसँग विभाजित गर्ने, जसले न्यूक्लिएटेड कोशिकाहरूलाई नोक्सान गर्दैन र रातो रक्त कोशिकाहरूलाई पूर्ण रूपमा हटाउन सक्छ। Lysate क्लीभेज एक हल्का रातो रक्त कोशिका हटाउने विधि हो, जुन मुख्यतया इन्जाइम पाचन द्वारा फैलिएको टिश्यू कोशिकाहरूको अलगाव र शुद्धीकरणको लागि प्रयोग गरिन्छ, लिम्फोसाइट्सको विभाजन र शुद्धिकरण, र टिस्यु प्रोटीन र न्यूक्लिकको प्रयोगहरूमा रातो रक्त कोशिकाहरू हटाउन। एसिड निकासी। रातो रक्त कोशिकाहरूको लाइसेट द्वारा प्राप्त टिश्यु कोशिकाहरूमा रातो रक्त कोशिकाहरू हुँदैनन्, र यसलाई थप प्राथमिक संस्कृति, सेल फ्युजन, प्रवाह साइटोमेट्री, न्यूक्लिक एसिड र प्रोटीनको पृथकीकरण र निकासी आदिका लागि प्रयोग गर्न सकिन्छ।
प्रयोगको लागि निर्देशनहरू
टिश्यू सेल नमूना
1. ताजा तन्तुहरू प्यान्क्रियाज/इन्जाइम वा कोलाजेनेजद्वारा पचाइएको थियो र एकल सेल निलम्बनमा छरिएको थियो, र सेन्ट्रीफ्युगेशनद्वारा सुपरनेटेन्ट खारेज गरिएको थियो।
2. फ्रिजबाट ELS lysate 4â मा लिनुहोस्, 1:3-5 को अनुपातमा सेल precipitate मा ELS lysate थप्नुहोस् (3-5ml lysate को 1ml को सेल कम्प्याक्टेड थप्नुहोस्), बिस्तारै उडाउनुहोस् र मिश्रण गर्नुहोस्।
3. 800-1000rpm मा 5-8 मिनेटको लागि सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस् र माथिल्लो रातो स्पष्ट तरल खारेज गर्नुहोस्।
4. अवक्षेपित भागलाई हाङ्कको घोल वा सीरम-रहित कल्चर समाधानले २-३ पटक जम्मा गरी सेन्ट्रीफ्युज गरिएको थियो।
5, यदि क्र्याकिंग पूर्ण/पूर्ण छैन भने चरण 2 र 3 दोहोर्याउन सकिन्छ।
6. पछिल्ला प्रयोगहरूको लागि पुन: सस्पेन्सन कक्षहरू; यदि आरएनए निकालिएको छ भने, DEPC पानी प्रयोग गरेर चरण 4 बाट तयार गरिएको घोलमा त्यसो गर्नु उत्तम हुन्छ।
रातो रक्त कोशिकाहरूको जीवन चक्र धेरै छोटो हुन्छ, केवल 120 दिन, तर तिनीहरूले रगतलाई धेरै चाँडै पुन: उत्पादन गर्छन्, र यस अवस्थामा तिनीहरू विशेष गरी कोशिका विभाजन गर्न सक्षम छन्, र तिनीहरू सबै भन्दा छिटो विभाजित कोशिकाहरू हुन्, त्यसैले यो कोशिका धेरै मूल्यवान छ, त्यसैले यो सेल संस्कृति को लागी धेरै उपयोगी छ। यो धेरै सरल छ, यसमा कुनै पनि अंगहरू छैनन्, केवल कोशिका झिल्ली र प्रोटीनहरू।