एलिसा किट एन्टिजेन वा एन्टिबडीको ठोस चरण र एन्टिजेन वा एन्टिबडीको इन्जाइम लेबलिंगमा आधारित छ। ठोस वाहकको सतहमा बाँधिएको एन्टिजेन वा एन्टिबडीले अझै पनि आफ्नो इम्युनोलोजिकल गतिविधिलाई कायम राख्छ, र एन्जाइम लेबल गरिएको एन्टिजेन वा एन्टिबडीले यसको इम्युनोलोजिकल गतिविधि र इन्जाइम गतिविधि दुवैलाई कायम राख्छ। निर्धारणको समयमा, परीक्षण अन्तर्गत नमूना (जसमा एन्टिबडी वा एन्टिजेन मापन गरिन्छ) ठोस क्यारियरको सतहमा एन्टिजेन वा एन्टिबडीसँग प्रतिक्रिया गर्दछ। ठोस वाहकमा बनेको एन्टिजेन-एन्टिबडी कम्प्लेक्सलाई तरलमा रहेका अन्य पदार्थहरूबाट धुँदै अलग गरिन्छ।
इन्जाइम-लेबल एन्टिजेन्स वा एन्टिबडीहरू थपिन्छन्, जुन प्रतिक्रियाद्वारा ठोस वाहकमा बाँधिन्छ। यस समयमा, ठोस चरणमा इन्जाइमको मात्रा नमूनामा पदार्थको मात्राको अनुपातमा हुन्छ। इन्जाइम प्रतिक्रियाको सब्सट्रेट थपेपछि, सब्सट्रेटलाई इन्जाइमद्वारा रंगीन उत्पादनहरू बन्न उत्प्रेरित गरिन्छ। उत्पादनको मात्रा सीधा नमूनामा परीक्षण गरिएको पदार्थको मात्रासँग सम्बन्धित छ, त्यसैले गुणात्मक वा मात्रात्मक विश्लेषण रङको गहिराइ अनुसार गर्न सकिन्छ।
इन्जाइमहरूको उच्च उत्प्रेरक दक्षताले अप्रत्यक्ष रूपमा प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाको परिणामहरूलाई बढाउँछ, परखलाई अत्यधिक संवेदनशील बनाउँछ। एलिसा एन्टिजेन्स निर्धारण गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ, तर एन्टिबडीहरू निर्धारण गर्न पनि प्रयोग गर्न सकिन्छ।
ELISA किट को आधारभूत सिद्धान्तहरू
यसले एन्जाइमसँग वस्तु जडान गर्न एन्टिजेन र एन्टिबडीको विशिष्ट प्रतिक्रिया प्रयोग गर्दछ, र त्यसपछि मात्रात्मक निर्धारणको लागि इन्जाइम र सब्सट्रेट बीच रङ प्रतिक्रिया उत्पन्न गर्दछ। मापनको वस्तु एन्टिबडी वा एन्टिजेन हुन सक्छ।
निर्धारण को यो विधि मा तीन अभिकर्मक आवश्यक छ:
â ठोस चरण एन्टिजेन वा एन्टिबडी (प्रतिरक्षा शोषक)
â¡ एन्जाइम लेबल गरिएको एन्टिजेन वा एन्टिबडी (मार्कर)
एन्जाइम कार्यको लागि सब्सट्रेट (रङ विकास एजेन्ट)
मापनमा, एन्टिजेन (एन्टिबडी) पहिले ठोस वाहकसँग बाँधिएको हुन्छ, तर अझै पनि यसको प्रतिरक्षा गतिविधि कायम राख्छ, र त्यसपछि एन्टिबडी (एन्टिजेन) र इन्जाइमको एक संयुग्मित (मार्कर) थपिन्छ, जसले अझै पनि यसको मूल प्रतिरक्षा गतिविधि र इन्जाइमलाई कायम राख्छ। गतिविधि। जब कन्जुगेटले ठोस वाहकमा एन्टिजेन (एन्टिबडी) सँग प्रतिक्रिया गर्छ, इन्जाइमको सम्बन्धित सब्सट्रेट थपिन्छ। त्यो हो, उत्प्रेरक हाइड्रोलाइसिस वा REDOX प्रतिक्रिया र रंग।
यसले उत्पादन गर्ने रंगको छाया एन्टिजेन (एन्टिबडी) को मात्रा मापन गर्न समानुपातिक छ। यो रंगीन उत्पादन नाङ्गो आँखा, अप्टिकल माइक्रोस्कोप, इलेक्ट्रोन माइक्रोस्कोप द्वारा अवलोकन गर्न सकिन्छ, स्पेक्ट्रोफोटोमिटर (इन्जाइम लेबल उपकरण) द्वारा पनि मापन गर्न सकिन्छ। विधि सरल, सुविधाजनक, छिटो र विशिष्ट छ।